PREPARASI KROMOSOM TEKNIK JARINGAN PADAT

PREPARASI KROMOSOM TEKNIK JARINGAN PADAT

Preparsi Kromosom
 Tujuan
Untuk mengetahui bentuk, ukuran dan jumlah kromosom dari suatu mahluk hidup.
 Prinsip
Kromosom akan berada dalam bentuk sempurna ketika pembelahan sel terjadi pada tahap metafase.

TAHAP – TAHAP PEMBUATAN KROMOSOM TEKNIK JARINGAN PADAT
1. Menyiapkan alat dan bahan
2. Pembuatan reagen
3. Perendaman dengan kolkisin dan pengawetan jaringan
4. Pembuatan preparat
5. Perwarnaan preparat

PESIAPAN ALAT DAN BAHAN
Alat
1. Timbangan
2. Mikroskop binokuler
3. Hot plate
4. Kertas tissue
5. Gelas obyek
6. Alat bedah (pinset dan pisau bedah)
7. Pipet tetes
8. Gelas obyek cekung

Bahan
1. Kolkisin (C22H25NO6)
2. Metanol atau etanol (C2H5OH)
3. Kalium klorida (KCl)
4. Asam asetat glacial (CH3COOH)
5. Giemsa
6. Akuades

PEMBUATAN REAGEN
1. Larutan kolkisin 0,07% w/v
2. Larutan hipotonik 0,075 M (1 liter)
3. Larutan carnoy (perbandingan 1:3)
4. Larutan alkohol 70%
5. Larutan giemsa 20%
6. Asam asetat 50%

PERENDAMAN DENGAN KOLKISIN DAN PENGAWETAN JARINGAN
1. Ikan direndam dalam larutan kolkisin 0,07% w/v selama 6 – 9 jam.
2. Sirip ekor dan insang ikan dipotong kecil – kecil, lalu direndam dalam larutan hipotonik.
3. Jaringan difiksasi dengan larutan carnoy selama 60 menit.
4. kemudian dilanjutkan dengan pembuatan preparat.

Pembuatan perparat
1. Jaringan yang telah difiksasi diambil dengan menggunakan pinset.
2. Kemudian jaringan tersebut diletakan diatas gelas obyek cekung dan ditambahkan 3-4 tetes asam asetat 50%.
3. Gelas objek yang akan digunakan terlebih dahulu direndam dalam alkohol 70%.
4. Suspensi sel yang terbentuk diambil dengan mengunakan pipet tetes dan ditetesan diatas gelas obyek.

PERWARNAAN PREPARAT
1. Preparat yang telah berisi lingkaran (ring) diwarnai dengan lautan giemsa 20% sebanyak 3 – 5 tetes lalu disebarkan.
2. Preparat dibilas dengan menggunakan akuades lalu dibiarkan kering udara.
3. Preparat diamati di bawah mikroskop



Kesimpulan :
1. Pada saat proses pembelahan sel metafase kromosom berada ditengah sel.
2. Larutan yang diunakan untuk menghentikan perkembangan sel pada pembelahan metafase adalah kolkisin.
3. Dalam perendaman dengan larutan hipotonik setiap 30 menit harus diganti karena larutan ini akan mengalami titik jenuh.
4. Dalam pengamatan tidak semua ikan dan bagian yang diambil berhasil ditemukan kromosomnya

Prosedur Ekstraksi DNA
1. Penghancuran Sel (cell lysis)
2. Eliminasi RNA
3. Pengendapan Protein
4. Pengendapan DNA